莱克多巴胺属β-受体激动剂类药物，人体食入易出现毒副作用，因此许多国家都将其列为违禁药物。国家卫生部、农业部、药品监督管理局发出的公告明确禁止莱克多巴胺在食用动物中使用。 HPLC或GC-MS一直用作检测β-兴奋剂的方法，但是其前处理步骤繁琐，费用昂贵。酶联免疫检测试剂盒则可经济、快速地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的莱克多巴胺。本试剂盒采用直接竞争酶标免疫法定量测定尿样、肝脏、水、饲料和肌肉中的莱克多巴胺。

 

莱克多巴胺检测试剂盒是利用免疫学直接竞争法的原理，固相载体微孔板上包被有莱克多巴胺蛋白偶联物，加入待测莱克多巴胺标准品或样品溶液及莱克多巴胺的酶标记物抗体，包被在微孔板上的莱克多巴胺蛋白偶联物和标准品或样品中的莱克多巴胺竞争性地与酶标记物抗体结合，形成抗原抗体复合物；洗涤后加入显色剂，结合的酶标记物将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450 nm波长进行检测，样品中的莱克多巴胺浓度与吸收光强度成反比。

 

（1）96孔酶标板：   1块 96T/8孔。
（2）标准品：      0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1mL/瓶）
（3） 酶标记物：       1瓶（7 mL）。
（4）底物缓冲液：      1瓶（7 mL）。
（5）底物液：          1瓶（7 mL）。
（6）终止液：          1瓶（7 mL）。
（7）20倍浓缩洗涤液：  1瓶（50 mL）， 加蒸馏水稀释到1000 mL  。

（8）使用说明书        1 份
（9）封板膜：          2 张

（10）封口袋：         1 个

 

灵敏度：0.1 ppb

半抑制浓度（IC₅₀）：≤1.0 ppb

标准曲线范围：0.1-8.1 ppb 

精确度：板内变异误差小于10%，板间变异误差小于15%

准确性（回收率）：尿液、组织、饲料：100±20%

 

 

Analytes                                          Cross-reactivity

Ractopamine                                   100.0

Ractopamine Gluc.A                         1.0

Ractopamine Gluc B                         5.8 

Ractopamine Gluc C                         387.0

(1S,3S) –Ractopamine                    1.9

(1R,3S)-Ractopamine                       0.9

(1S,3R)-ractopamine                       98.5

(1R,3R)-ractopamine                       451.7

Dobutamine                                     0.1

Ritodrine                                         2.4

Isoxsuprine                                     0.1

Salmeterol                                       0.1

Fenoterol                                         0.1

Clenbuterol                                  <0.01

Salbutamol                                   <0.01

 

1．尿样 （稀释倍数为1）

取50 μL尿样进行实验。浑浊尿样以4000 r/min离心5分钟，取上清（清亮部分）。
 2．组织 （稀释倍数为1）

a． 取2g±0.05 g组织，加入6 mL乙腈-0.1 M HCl（V乙腈：VHCl=84：16），振荡10 min,室温4000 r/min以上离心10 min。

b． 取上清3 mL，加入2 mL 0.1M NaOH，加入6 mL乙酸乙酯，振荡10 min，室温4000 r/min以上离心10 min。取全部上清于50 ℃氮气或空气吹干。

C． 加入1 mL双蒸水复溶，取50 μL进行分析。

3． 饲料（稀释倍数10）：

用研钵研碎饲料，称1 g研碎的饲料样品加入2 mL的0.01 M的PBS，涡旋5分钟。用20000 rpm离心5分钟，转移出上清液。吸取10 μL加入40 μL0.01 M的PBS中进行检测。

 

1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡田30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。

3．加入50 μL样品或标准品到微孔板中，再加入50 μL酶标记物到微孔板中，充分振荡混匀，用盖板膜盖板后，室温下反应30 min（或37℃下反应20 min）。
4． 弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩稀释液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。
5．加入50 μL底物液缓冲液，再加入50 μL底物液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，在室温（或37℃）暗处孵育10 min。
6．加入50 μL终止液到微孔板中，混合好在450 nm处测量吸光度值，必须在加入终止液后20 min内读取光度值。

 

1．使用之前将所有试剂回升至室温，使用之后立即将所有试剂放回2-8 ℃。在EIA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。

2．终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。

3．不要使用过了有效日期的莱克多巴胺检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。

4．0标准品的OD值小于0.5时，表示试剂可能变质，请勿使用。

5．显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。

 

1． 2-8℃保存，切勿冷冻。

2． 将不用的酶标板放进带干燥剂的封口袋中密封保存。

3． 酶标记物和显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。