UNG酶用途

因PCR是一種極敏感的擴增技術，易受污染的影響。小量的外源 DNA 污染可以與目的模板一塊被擴增。當前一次擴增產物用來進行新的擴增反應時，會發生共同來源的污染，這稱之為殘餘污染；從其他樣品中純化的 DNA 或克隆的 DNA 也會是污染源。衛生部已經明確規定，凡是用於臨床檢驗的PCR試劑，都應該有 UNG酶技術，以防止污染。

控制污染的方法主要有兩種：

1 、在 PCR 實驗過程中使用良好的實驗步驟和實驗環境減少殘餘污染：使用抗氣霧劑移液管的阻止氣霧劑進入 eppendorf 管內；為 PCR 樣品配製和擴增后分析設計隔離的區域；在準備新反應前更換手套；總是使用不含有模板的陰性對照檢測污染；使用預先混合的反應成分，而不是每個反應的每個試劑單獨加入。

•  使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），這種酶（也稱為尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶）移除 DNA 中的尿嘧啶，在PCR反應液配製時，將dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得擴增產物含有脫氧尿嘧啶，這種產物對 UNG 敏感，所有可以在PCR前對新配製的反應用 UNG 處理以破坏殘餘產物，杜絕污染。

UNG酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大腸桿菌經誘導表達后，再經三次過柱純化分離出來的重組蛋白。

•  50ul 體系中，加入0.1U的UNG酶，能夠消除 10 7 帶有 dUTP 的、大於 6 個碱基的雙鏈DNA 污染。

•  反應條件： 37℃ ，2分鐘；反應 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以滅活。