一說起支原體，估計細胞培養的人員就開始手心冒汗了。細胞培養中的急性污染很容易察覺，而支原體則像慢性毒藥一般，殺細胞于無形中。除了非常有經驗的老手，很多實驗人員都察覺不到支原體的污染，據統計，超過25%的細胞系中感染了支原體，而研究者大多並不知曉。早期，血清可能是最主要的污染源；之後，通過實驗室的儀器、培養基或其他試劑慢慢蔓延開來，細胞無不中招。怎樣才能根除討厭的支原體污染呢？讓我們先來認識這個小東西。

狡猾的支原體

支原體是唯一一種沒有細胞壁的原核生物，大多呈不規則球狀或絲狀。由於它的直徑小，而且形狀靈活，所以能逃過實驗室常用的濾膜。

檢測、檢測、再檢測

對培養物進行常規的支原體檢測非常重要。儘管各個實驗室的檢測頻率不同，從幾個星期到幾個月不等，不過這主要取決于你們實驗室有多少人接觸細胞，以及你們引進新細胞的頻率。比如美國國立細胞培養中心，它經常從其他實驗室獲得細胞培養物，就會對每個樣品進行檢測，並將它們隔離，直至最後証明沒有支原體污染。一般來說，每兩三個月進行一次定期檢測是必要的。如果有新細胞進入實驗室，或準備將細胞進行液氮保存，都應該進行檢測。當然，如果細胞不大對勁，應立馬檢測。

支原體檢測：

檢測頻率是一方面，選擇合適的檢測方法也很重要。到底是PCR、生化分析，ELISA還是免疫熒光呢？PCR應該是檢測支原體的理想方法，他綜合了幾個優勢，靈敏、特異、快速、廉價等。細胞培養上清可以直接用來檢測，非常方便。Applichem公司提供的高靈敏度PCR Mycoplasma Test Kit（A3744）,該試劑盒引物源於支原體基因的保守序列，而且即用型的PCRmix使您的使用更加方便，同時更是提供了陽性對照。當然為了避免假陽性和假陰性，試驗中必須設立多種對照：除了陽性對照外，還有陰性對照和內對照。

用Hoechst33258染料檢測支原體是很多教科書上推薦的方法。由於支原體含有DNA，能與Hoechest33258染料結合，在500倍數放大情況下，表現為細胞顆粒或纖毛染色。但操作過程較為繁瑣，且需要一定的經驗辨別支原體，新手可能大不容易掌握。

支原體污染和清除：

如果很不幸，你的細胞已經感染了支原體，怎麼辦？大部分人的想法可能都是把感染的細胞扔掉，重新開始。一旦感染了支原體，細胞復原的機會很小。所以在液氮中多儲存一些備份還是比較明智的選擇。

如果你的細胞非常稀有且珍貴，那只能去奮力搶救了。拿什麼拯救你，我的細胞？由於支原體沒有細胞壁，且代謝慢，故大部分傳統的抗生素都不奏效。但是北京西美杰公司提供了一些Applichem的支原體清除試劑。Myco-3（A5240），Myco-1（A5222）Myco-2(A5233)。這三類支原體清除試劑是有多種支原體敏感的抗生素研製而成，無細胞毒性。100倍濃縮液直接加入培養基，使用方便。具體的使用方法如下：

Myco-3加入培養基中，每2-3天換液一次，連續處理14天，可有效清除絕大多數支原體污染。

頑固支原體需Myco-1和Myco-2聯合使用：Myco-1處理4天后換Myco-2處理3天，如此重複2-3次。

支原體預防：

雖然說支原體可以剷除，但這種勞心勞力的事情估計沒有人願意做，那麼平時的預防更重要。北京西美杰公司還提供了几樣好東西，能預防支原體的污染。具體介紹如下Incubator-Clean（A5230）

用於CO2培養箱的消毒，噴一噴，徹底預防支原體、細菌和病毒等的污染。

Incuwarter-Clean（A5219）

用於CO2培養箱內保持空氣濕度的水源消毒，100*即用型濃縮液。

Aquabator-Clean（A5225）

用於水浴的消毒，有效防止各類污染。

需要特別提及的是，液氮罐中也可能有支原體。支原體能耐受液氮的低溫，雖然不會增殖，但會污染你的細胞。因此，細胞凍存管還是不要放在液氮內，以免液氮滲進入細胞，而是儲藏在液氮的氣相中。

不過，預防支原體污染的最佳方法還是良好的細胞培養技巧和正確的態度。雖然這些都是老生常談，但一旦熟悉了細胞培養，就很容易麻痺大意，時常敲敲警鐘還是相當必要的。下面我將北京西美杰公司提供的有關支原體預防，檢測和清除的產品做一個總結：

 

支原體預防：

品牌	貨號	品名	規格	報價
Applichem	A5230	Incubator-Clean™	500ml/1L	1036/1884
Applichem	A5219	Incuwater-Clean™	100ml	436
Applichem	A5225	Aquabator-Clean™	50ml	436

 

支原體檢測：

品牌	貨號	品名	規格	報價
Applichem	A3744	PCR Mycoplasma Test Kit	10T/20T	3124/5192

 

支原體清除：

品牌	貨號	品名	規格	報價
Applichem	A5222	Myco-1	10ml/20ml/100ml	884/1537/6140
Applichem	A5233	Myco-2	10ml/20ml/100ml	695/1052/4145
Applichem	A5240	Myco-3	10ml/20ml/100ml	489/884/3560

 

   除了支原體預防，檢測和清除方面的試劑外，北京西美杰公司還提供了Applichem細胞培養相關方面的其他試劑，包括各種細胞培養基，氨基酸，抗生素以及糖和鹽類。同時也包含了常用的其他生化試劑，如有需要可隨時撥打我們的電話：010-88597838.