乙炔雌二醇（EE2)ELISA檢測試劑盒說明書

（請以英文為準，中文僅供參考）

一、有限的保証

Japan EnviroChemicals, Ltd. (the Company, hereunder)保証此產品是按相關規定生產的在材料上沒有任何問題。這個保証書規定：對於問題產品原價賠償或用新的產品替換問題產品。用戶要在收到產品30天內向公司提出書面報告，過期不候。另外，這份保証書僅適用於正常使用產品，如果是由於用戶的粗細大意，失誤或不合理的使用造成的問題，本公司概不負責。

產品的設計在不斷的改進，我們將會對說明書做出相應的修改，對此我們將不會提前通知。

二、試劑盒特征

 E E2單克隆抗體特異地與EE2結合，和其它結構相類似的化學物質不發生交叉反應。單克隆抗體質量穩定每批次間幾乎沒有變化。

 定量檢測範圍0.05ug/L – 3ug/L (ppb)，可以滿足生物樣品的檢測需求如水樣和血液 。

 操作簡單，整個過程僅花費2.5小時。

 這個試劑盒有很高的重複性，變異係數在10%之內。

 需要很少的樣品就可以檢測。

 試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時檢測多個樣品，花費合理。

三、檢測原理 （競爭ELISA）

1. 競爭性反應 

這個檢測方法依靠EE2單克隆抗體來識別EE2。樣品中的EE2和一個EE2-酶結合物預先混合然後加入到每個微孔中競爭與包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中EE2的濃度如果高于EE2 -酶結合物，EE2將主要與抗體結合。反之樣品中EE2的濃度如果低於于EE2 -酶結合物，EE2 -酶結合物將主要與抗體結合。

2. 顯色反應 

通過洗滌步驟去除沒有反應的EE2和過量的EE2-酶結合物。和微孔板中抗體結合的EE2 -酶結合物催化底物發生反應產生有色物質。通過一個孵育期用稀酸終止反應。樣品中EE2的濃度越高導致結合到微孔板抗體上的EE2-酶結合物越少，從而產生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析 

利用已知的EE2標準的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應曲線（標準曲線）。把樣品的吸光度值用內插法插入到標準曲線中可以精確的計算出樣品中EE2的濃度。注意：

四、ES測定流程圖

1、樣品前處理

在檢測前半小時把試劑盒從冰箱中拿出來使其恢復到室溫（18-25°C）。過濾樣品，加入甲醇使其含甲醇的終濃度為10% (v/v)。對於一些樣品需要固相提取。

2、標準溶液

用10%的甲醇溶液稀釋EE2標準濃縮液(#2)（10乘），制備成濃度為10ug/L EE2 稀釋的儲存液。然後進一步稀釋成濃度範圍為：0.05ug/L to 3ug/L 

3、抗原-酶結合物溶液

配製一瓶抗原-酶結合物溶液：抗原-酶結合物粉末(#3) + 7ml 緩衝液(#4, white cap)。

4、標準/樣品 與結合物混合

在沒有包被的微孔板(#9)中混合100uL EE2標準溶液(或樣品)和100ul酶結合物溶液。

5、競爭反應

在包被抗體的微孔板(#1)的每個孔中加入100μL在上面步驟中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

6、洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）

7、沒有結合的物質（洗滌）

每個微孔加入約300μL、1×洗液，然後棄掉洗液到合適的容器中，重複洗3次。在一層厚的吸水紙上拍板，去掉殘留的洗液。

8. 顯色試劑

以1：10的比例混合色原體(#6)和底物溶液(#7)配製一個顯色液。

9. 顯色

每個微孔加入100μL顯色試劑，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然後加入每孔再100μL的終止液(#8, 黑蓋)終止反應。

10. 定量

在450nm測定每個標準的吸光度值製作標準曲線。利用內插法把樣品的吸光度值代入標準曲線計算樣品中EE2的含量。

五、所需材料

1、試劑盒組成

編號	Contents	體積	數量	儲存
1	MoAb-Coated Microplate  單抗包被微孔板	96 Wells	1 Plate	2-8°C
2	EE2 標準 (溶于10%MeOH)，濃度為100 ug/L	4mL	1 Vial	2-8°C
3	Antigen-enzyme Conjugate 抗原-酶結合物	7mL	2Vials	2-8°C
4	Buffer Solution – white cap – 緩衝液-白蓋	8mL	2 Vials	2-8°C
5	Wash Solution (6-fold concentration) 洗液（6x濃縮）	50ml	1 Vial	2-8°C
6	Chromogen  Solution色原體溶液	250uL	1 Vial	2-8°C
7	Substrate  Solution 底物溶液 紅蓋	15mL	1 Vial	2-8°C
8	Stop Solution – black cap – 終止液-黑蓋	15mL	1 Vial	2-8°C
9	Uncoated Microplate 沒有包被抗體微孔板	96 Wells	1 Plate	---
10	封板膜	---	1	---
11	Instruction Booklet 說明書	---	1	---