苏丹红ELISA试剂盒

苏丹红ELISA试剂盒
型号:CFC015D
品牌:艾瑞德生物
原产地:中国
类别:化工 / 生物化学品
标签︰检测试剂盒 , elisa试剂盒 , 检测试纸条
单价: -
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产品描述

一、原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的苏丹红和微孔条上预包被的偶联抗原竞争苏丹红抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留物苏丹红的含量成负相关,与标准曲线比较可得出相应苏丹红的含量。
 
二、试剂盒技术指标
试剂盒灵敏度:         0.4ppb
样本定量检测下限
水基质(番茄酱、坛坛乡)   0.4ppb
油基质(辣椒油,辣椒酱)   0.4ppb
粉末状(辣椒粉)          1.0ppb
交叉反应率
苏丹1号 ……………………………………………… 100%
苏丹2号 ……………………………………………… <1%
苏丹4号 ……………………………………………… <1%
对位红 ………………………………………………… 120%
样本回收率
水基质 ……………………………………………… 75±10%
油基质 ……………………………………………… 50±10%
粉末状 ……………………………………………… 65±10%
 
三、 试剂盒组成
1、微量测试孔:96T
2、 标准品液:(1ml/瓶) 0ppb、0.4ppb、3.2ppb、6.4ppb、12.8ppb、25.6ppb
3、 酶标记物          12ml
4、 抗体工作液        7ml
5、 底物缓冲液破      7ml
6、 底物液            7ml
7、 终止液            7ml
8、 20倍浓缩洗涤液   50ml
9、1mg/ml标准品液:(0.2ml)
 
四、样本处理
取1g样品(辣椒面、辣椒油、辣椒酱、番茄酱),加入3 mL丙酮溶液,超声震荡20 min,涡旋混合0.5 min,静置10 min, 3000 r/min离心分离10 min,取上清100 μL用PBST稀释10倍至1 mL,取50 μL进行ELISA测定。
 
五、操作步骤
1. 将试剂盒从冷藏环境中取出,置于室温(20~26℃)下平衡30min以上,将需用的条板固定于支架,按顺序编号;
2. 洗液配制:将50 mL浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水稀释至1000 mL备用。(或按需量稀释)
3. 标准品的配制:先将试剂盒中的1 mg/mL苏丹红标准品用洗液稀释1000倍,变成1000 ng/mL,再用洗液将1000 ng/mL的标准品分别稀释成0.4 ng/mL, 3.2 ng/mL,6.4 ng/mL,12.8 ng/mL,25.6 ng/mL。(现配现用)
4. 在标准品孔中加入50 μL标准品,样品孔加入50 μL待测样品,然后每孔加入50 μL抗体(加入标品和样品时无时间差的影响),轻拍混匀,37℃下孵育30min;
5. 倒出孔中的液体,以试剂盒浓缩洗液稀释20倍后作为洗液,用洗板机洗涤4~6遍;没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中,静置20 s,倒出孔中的液体,将微孔架倒置,在吸水纸上连续拍打3次以上,以保证完全除去孔中的液体,重复操作4~6遍;
6. 每孔加入酶标记物100 μL,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min ,取出重复洗板步骤。
7. 显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL.轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后,置37℃ 环境中反应10 min
8. 测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡混匀.设定酶标仪于450 nm处(建议用双波长450/630 nm 检测,在20 min内读完数据),测定每孔OD 值,根据标准曲线计算样品浓度。
 
标准样品配制方法:
(1)准备5个1 mL瓶子,其中一个加入1000 μL洗液,一个加入700 μL洗液,其余的分别加入500 μL洗液。
(2)在1000 μL洗液瓶子中先吸出25.6 μL的洗液,然后加入25.6 μL的1000 ng/mL标准品,混匀,使其浓度为25.6 ng/mL,作好记号;
(3)再从25.6 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中,使其浓度为12.8 ng/mL,混匀,作好记号;
(4)再从12.8 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中,使其浓度为6.4 ng/mL,混匀,作好记号;
(5)再从6.4 ng/mL的瓶子中吸出500 μL加入其中一个500 μL洗液的瓶子中,使其浓度为3.2 ng/mL,混匀,作好记号;
(6)再从3.2 ng/mL的瓶子中吸出100 μL加入其中一个700 μL洗液的瓶子中,使其浓度为0.4 ng/mL,混匀,作好记号。 (加样前应将标准品充分混匀,配好后在半小时内使用)
 
七、 结果判定
以标准品百分吸光率为纵坐标,以苏丹红标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中苏丹红实际浓度。
 
八、 注意事项
1.室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20-25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2.洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3.混合要均匀,洗板要彻底,否则会出现重复性不好的现象。
4.反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5.将不用的微孔板放进自封袋重新密封; 标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
6.不要使用过了有效日期的试剂盒,不要使用不同批号试剂盒中的试剂。
7.显色液若有任何颜色表明变质,应当弃之,0标准的吸光度值小于0.6时,表示试剂可能变质。
8.该试剂盒最佳反应温度为25 ℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
 
九、储藏条件和保质期
储藏条件:试剂盒于2-8℃保存,不要冷冻。
保 质 期:该产品有效期为1年,生产日期见包装盒。
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最后上线︰2019/03/13