產品描述:TonkBio cDNA 第一鏈合成試劑盒是專門用於兩步法RT-PCR的第一步,含有合成高質量第一鏈cDNA所需的所有成分,適用於後續的PCR、qPCR以及基因克隆。採用的是無RNase H活性的M-MLV逆轉錄酶,避免了第一鏈cDNA合成過程中RNA/DNA雜交體中RNA被降解,具有高效的逆轉錄活性,適合合成長達9 k的cDNA片段。
產品編號 |
產品規格 |
價格 |
TB30001A |
50 rxns |
¥1440 |
TB30001B |
100 rxns |
¥2700 |
產品特點:優化配製了用於第一鏈cDNA合成反應的各種成分,試劑盒中的ToneScript M-MLV具有高效的逆轉錄活性,避免了第一鏈cDNA合成過程中RNA/DNA雜交體中RNA被降解,具有高效的逆轉錄活性。適合後續的PCR、定量PCR以及PCR克隆,適用於各種PCR耐熱聚合酶。
應用舉例:反轉錄性
常見問題解析:
1、 沒有RT-PCR產物或產量低
◆RNA模板降解。RNA 的純度和完整對於反轉錄得到全長cDNA是非常重要的。提取的RNA應進行電泳檢測以確定其是否降解。同時RNA要避免多次反復凍融。
◆RNA模板純度低。提取RNA的過程中,可能殘留一些鹽離子、試劑,如 EDTA、酚、胍鹽、磷酸鹽、多胺等抑制接下來的反轉錄反應。建議用75%乙醇(DEPC 水配製)仔細清洗RNA沉澱。
◆引物不合適。選擇合適的引物,當RNA是細菌RNA或者是沒有polyA尾的RNA要選擇隨機引物或者特異引物。
◆目的基因含有複雜二級結構或高GC含量。建議選擇隨機引物進行反轉錄。將反轉錄溫度提高至55℃。
2、RT-PCR 產物比預期長
◆RNA 中很可能污染了DNA。真核生物基因組DNA中含有內含子,可能參與了 PCR擴增,可以在反轉錄之前對RNA進行DNaseI的消化。
3、陰性對照中有RT-PCR產物
◆陰性對照中有RT-PCR產物也表明有DNA的污染。在反轉錄之前對RNA進行DNase I 的消化。
上海同科生物科技有限公司 | |
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國家/地區︰ | 上海市杨浦区 |
經營性質︰ | 生產商 |
聯繫電話︰ | 18201706258 |
聯繫人︰ | 孟小姐 (市場推廣) |
最後上線︰ | 2017/06/16 |