SCCA-Lisa    XG004  
SCCA檢測及量化的ELISA試劑盒
  
        鱗狀細胞癌抗原（SCCA）是一種腫瘤細胞相關抗原，可作為很多種鱗狀細胞癌的血清學及組織學標記。SCCA是卵清蛋白家族成員之一，具有Ser（絲氨酸）蛋白酶抑制劑作用。現已發現血液中SCCA蛋白的水平與一些臨床晚期鱗狀細胞癌（包括宮頸癌、肺癌、食道癌、腦頸部逆轉乳頭狀瘤）具有很大的相關性，因而可以作為一種生物學標誌物（Ref1,2）。另外，已報道，用免疫組化技術檢測時，SCCA蛋白（SCCA1、SCCA2及SCCA-PD）在85％的肝細胞癌（HCC）患者的肝臟中超常表達（Ref3,4）。  
        對子宮頸鱗狀細胞癌的臨床研究顯示了在腫瘤發生過程中游離SCCA水平上升的患者比例，從Stage  0的12％到Stage  IV的90％。腫瘤切除后游離SCCA水平下降，但是病情復發后90％的患者該抗原的水平重又升高。此外，檢測療后SCCA的水平還有助于監控病人的治療效果、預測腫瘤的復發及病灶的轉移（Ref  6）。
        SCCA-Lisa是一種靈敏、特異、標準化的Elisa試劑盒，可對組織/細胞的培養液、組織或細胞的蛋白提取物、及血漿或血清樣品中的SCCA（SCCA1、SCCA2及SCCA-PD）蛋白進行體外檢測及量化分析（Ref  7）。

基本原理：
        SCCA的檢測通過與包被在微量滴定板上的捕獲抗體的結合而實現（雙抗體夾心法）。在  微滴定孔板上包被第一抗體，洗去未結合的蛋白，加入SCCA使之發生抗原抗體特異性結合后，加入生物素標記的第二抗體，再加入辣根過氧化酶（HRP）標記的鏈霉親和素，最後加入過氧化物酶底物進行顯色反應。由於捕獲抗體及檢測二抗的濃度跟SCCA的結合是一定的，反應孔中的光吸收值代表了SCCA抗原的濃度。

說明書：
提供的試劑及用品：
多條帶檢測板:  96孔板上用親和純化的兔抗SCCA抗體預包被
標準液：重組人SCCA封閉液：含100  ng/mL  BSA的PBS（1％的BSA）
第二抗體：親和純化的兔anti-SCCA的生物素標記的IgG（溶解于PBS中，濃度為200  μg/mL  ）。  
需自備的實驗材料：
稀釋液：PBS  buffer-1%BSA(W/V)0.05%Tween(v/v)  (PBS-S-T)
清洗緩衝液：
HRP-鏈霉親和素：辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素
過氧化物酶底物：ABTS
微孔板清洗儀及ELISA檢測儀

  

SCCA-Lisa  試劑盒的多條帶檢測板  
            
簡要使用說明：
樣品：分別在96孔板的每孔中加入100  μl稀釋后的樣品（濃度分別為10ng/mL,  5ng/mL,  2,5ng/mL,  1,25ng/mL,  0.31ng/mL,  0.16ng/mL），孵育1小時后用清洗緩衝液洗6次
第二抗體：用PBS-S-T稀釋生物素標記的二抗至終濃度5μg/mL，每孔加100μL，室溫下孵育1小時，用清洗緩衝液洗6次
HRP-鏈霉親和素溶液：用稀釋緩衝液以1:3000稀釋后每孔加入100  μL，室溫下孵育1h，洗6次
ABTS底物：每孔加入200  μL新鮮配製的ABTS底物溶液，置於暗處，室溫下顯色10-15分鐘，酶標儀上405nm處測其吸光值OD。在標準曲線上找到相應的濃度值。標準曲線如圖Fig.1所示。


參考文獻：
1.  Uemura  Y  et  al,  Int  J  Cancer,  89:368-377(2000)  
2.  Cataltepe  S  et  al,  Clin  Chem  Acta,  295:107-127(2000)

3.  Ruvoletto  MG  et  al,  J  Hepatology,  36:  83(2002)

4.  Pontisso  P  et  al,  Brit  J  Cancer,  90(4):833-837  (2004)

5.  Duk  JM  et  al,  Gynecol  Oncol,  39:186-194(1990)

6.  Lara  PC  et  al,  Cancer,  76:758-764  (1995)

7.  Quarta  S  et  al,  Digestive  and  Liver  Disease,36:A19  (2004)

  
  
Fig.1  與底物孵育15分鐘后SCCA標準曲線的線性範圍