植物金屬硫蛋白(MetalloThionein)簡稱MT,化學名為金屬硫組氨酸三甲基內鹽,是一類廣氾存在於生物中的低分子質量(6~7kD)、富含半胱氨酸(20%~30%)、是生物體內發現的一種最重要、最奇異、生理功能最多、巰基(-SH)的活性多肽物質,不含組氨酸和芳香族氨基酸的一類金屬結合蛋白質。最早是由Casterline和Barnett于1977年從大豆根中發現的。
1987年Lane等從小麥胚胎中發現Ec ( earlycyscontainingprote in)蛋白,並証明其氨基酸序列與動物MTs相一致,從而証明瞭植物體中含有MTs。MT能被金屬、細胞因子、荷爾蒙、細胞毒性藥物、有機化學藥物和應激等誘導。
(一)植物金屬硫蛋白(MT)的應用
金屬硫蛋白是生物體內普遍存在的一種重要的生命物質,不僅在醫藥領域有很大的應用潛力,還可以用於各種化妝品,作為多功能食品添加劑、營養、功能性口服液和其它多種保健品等。由於MT所具有的特殊而重要的生理學和生物學功能,植物MT生理功能大體上有如下幾點:(1)參與微量元素代謝和重金屬的解毒;(2)清除自由基及參與應激反應;(3)其含量往往與腫瘤有相關性,故有可能在腫瘤預防、治療、保護細胞抵抗重金屬和烷化劑的致瘤、致突變作用;也有可能成為腫瘤的標誌物。
主要應用領域如下:
1、醫藥領域:根據金屬硫蛋白與金屬之間的關係,利用金屬硫蛋白來研製解除金屬中毒的藥物,以用來防治環境污染造成的金屬中毒症。由於金屬硫蛋白具有消除自由基和應激保護作用,可用其在腫瘤放療時保護正常組織細胞免受射線損傷。它也能保護口腔細胞和粘膜,是防治口腔潰瘍病的良好藥物。另外在某些微量元素缺乏症、胃潰瘍,風濕性關節炎、艾滋病、腫瘤、抗炎症、感染、心血管系統疾病、休克等方面也能發揮作用。
2、化妝品添加劑:MT與SOD(超氧化物歧化酶)相比具有分子量小、清除羥基自由基能力強、熱穩定性高、半衰期長等優點,且MT還拮抗紫外線、60CO輻射等,非常適於開發為各種化妝品的添加劑。作為化妝品添加劑能防止機體衰老,起到抗衰老、清除色斑、減輕皺紋的作用。
3、功能性食品添加劑: 富含半胱氨酸的金屬硫蛋白(MT)與人體必需的微量元素結合可補充人體內微量元素的不足,因此科學家將MT又稱為"鋅儲存庫"。MT在體內可結合Co、Ag、Hg等重金屬離子,在重金屬粉尖污染的職業病中起解毒作用。同時其具有的抗輻射能力有助于減輕紫外線、X-射線的損害。
因此,金屬硫蛋白(MT)在功能性食品領域具有多方面的價值:可以製成抗重金屬和射線污染的功能性食品,尤其在當前日益嚴重的污染環境下將顯示出更大的價值。可以製成清除自由基、抗細胞氧化、延緩衰老的功能性食品。 MT能為生物體提供多種生命活動中必需的微量元素(如鋅、銅、鈷等),並具有拮抗重金屬(隔、汞和鋁),抗輻射(包括紫外線)和修復受損組織等功效 ,是一種極好的化妝品添加劑和生化試劑(自由基清除劑、抗氧化劑和生物解毒劑);也可作為一種安全的新型食品添加劑和具有排鉛、解毒(重金屬)、補充人體必需元素的特殊醫學用途配方食品的營養素。
(二)產品技術
普濟生物着重以桑葉、蘆筍等植物為原料,採用P2V2生物技術(一種植物蛋白分離及其定量緩釋金屬離子誘導合成金屬硫蛋白的制備方法,已申報專利),本發明針對現有金屬硫蛋白來源的侷限性,將純植物體中(新鮮植物)提取分離植物蛋白作為首要條件,再將分離得到的植物蛋白進行生物膜濃縮、金屬離子誘導、酶切洗脫、噴霧冷凍乾燥等工藝,在提取過程中MT-PSˉ蛋白採用ELISA法,純度80%~93%之間。總巰基採用DTNB巰基法與MT蛋白的理論摩爾比值20:1接近的原理為實驗依據進行植物MT蛋白提取與誘導合成,該方法具有成本低、提取率高,純度高、生物利用率高、安全無污染等工業特點,可用於規模化生產。與現有技術相比該方法具有以下優點:1、蛋白來源的選擇是純植物中提取分離獲得,植物蛋白資源得到充分利用,與其它來源的MT原料(如菌種培養、基因、動物肝臟等來源)相比,具有原料來源可靠、提取過程簡單、成本低、綠色安全等特點;2、濃縮液體蛋白的與金屬離子誘導,選擇的是人體必須的金屬元素作為融合載體表達體,能夠可溶性地、高產率穩定表達目標產物;3、目的蛋白能與金屬離子定量緩釋有效進行分類表達,得到純化后的不同結構的MT蛋白分子物質。4、整個提取過程的週期短,處理量大,反應所得目標產物回收率高,損失小、純度高、無二次污染,具有工業化批量生產等特點。
(三)產品指標
產品名稱:金屬硫蛋白(MT-Ⅱ)
CAS號:73767-16-5
分子量:6~7kDa
來源與品種:桑葉,蘆筍.MTs-ML、MTs-AS
結構特征:主要結合金屬元素有(鋅Zn、銅Cn、鎘Cd)等。Cys則散布在整個肽鏈中,它們均由81個氨基酸組成,含有17個Cys,其中14個Cys按CXC的形式排列,分布在整個氨基酸序列中。
性狀:白色或灰白色疏鬆體粉末
用途:(1)研究試劑。
(2)主要用於化妝品添加劑、食品添加劑、營養保健品添加劑、醫藥化工的的主要原料。
(3)生物解毒劑、重金屬螯合劑、羥自由基(·OH)清除劑。
應用注意事項 1、植物金屬硫蛋白適用PH範圍為:PH4~9
2、根據不同劑型,每kg基質原料添加MT;保健食品50PPM(50mg)、化妝品70PPM(70mg)。
3、金屬硫蛋白不宜用於強氧化條件下,耐熱65-85℃>1小時
4、安全性評估:符合MSDS要求
5、檢測方法:SDS聚丙烯酰胺電泳;HPLC-DEAE
6、貯藏條件:冷藏-10℃~25℃密封保存
7、包裝:(MT-Ⅱ)為瓶裝(10ml瓶)5g
8、保質期:24個月