呋喃它酮ELISA試劑盒

呋喃它酮ELISA試劑盒
型號:CFC004D
品牌:艾瑞德生物
原產地:中國
類別:化工 / 生物化學品
標籤︰檢測試劑盒 , elisa試劑盒 , 檢測試紙條
單價: -
最少訂量:1 盒

產品描述


一、 原理 


本試劑盒採用間接競爭ELISA方法檢測水產和雞肉等組織樣本中的AMOZ,在微孔條上預包被上偶聯抗原,利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的原理來進行的,樣本中的AMOZ和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗呋喃它酮代謝物的衍生物抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣品中的AMOZ含量與樣品的吸光度值呈反比,與標準曲線比較即可得出呋喃它酮代謝物含量。


 


二、 試劑盒技術指標:


試劑盒靈敏度:  0.1 ppb


樣本檢測下限:


組織、蜂蜜         0.2 ppb


魚/蝦等水產品組織因存在一定的干擾,檢測下限為0.3 ppb


回收率:


魚/蝦水產組織       90%±15%


蜂蜜/雞肉/肝臟樣本  80%±15%


交叉反應率:


呋喃它酮代謝物      100%


呋喃唑酮代謝物     ﹤0.1%


呋喃妥因代謝物     ﹤0.1%


呋喃西林代謝物     ﹤0.1%


 


三、試劑盒組成


1.微量測試孔:96T/8孔


2.標準品液: 0 ppb  0.1 ppb  0.3 ppb  0.9 ppb  2.7 ppb  8.1 ppb (1ml/瓶)


3.酶標記物                12ml


4.抗體工作液              7ml


5.底物緩衝液              7 ml


6.底物液                  7 ml


7.終止液                  7 ml


8.20倍濃縮洗滌液         50 ml


9.復溶液                  50 ml


10.15.1 mg衍生化試劑


 


四、 所用儀器、試劑


具備的儀器:  微孔酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振盪器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)


微量移液器:  單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道250µl


試       劑:  甲醇、氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀、鄰硝基苯甲醛、亞硝基鐵氰化鉀(K2Fe(CN)5·NO·3H2O)ZnSO4·7H2O


 


五、樣本前處理步驟


樣本處理前須知


處理任何樣本時,都必須注意:


(a)實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。


(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否乾淨,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。


樣本前處理需配製:


1.衍生化試劑 稱15.1 mg鄰硝基苯甲醛加甲醇10 mL溶解(濃度10 mM)


2.C液:(供奶樣用)稱12.5 g亞硝基鐵氰化鉀用去離子水定溶至100 mL。


      D液:(供奶樣用)稱29.8 g 硫酸鋅用去離子水溶解定溶至100 mL。


3.0.1 M K2HPO4 稱22.8 g K2HPO4·3H2O


加去離子水溶解定溶至1 L


4.1M HCl取8.6 ml濃HCl加水定溶至100 mL。


5.1M NaOH稱取4 g NaOH加水定溶至100 mL。


樣本的處理


(a) 肉樣或魚蝦


用均質器均質樣本,接(d)的描述方法


(b) 奶樣


1. 取出5 mL的奶樣本到玻璃離心管中,分別加入C液和D液各250 µL。


2. 用振盪器充分混合樣本,用恆溫離心機4000 r/min以上離心10 min(4-12 ℃).若沒有恆溫離心機,則先將樣本降溫至大約8 ℃,然後離心。


3. 接(d)的描述方法


(c) 蜂蜜 


1. 取1±0.05 g樣本到離心管中。


2. 加入4 mL的去離子水溶解,再加入0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化試劑,充分振盪。


3. 接(d)第2步描述方法


(d)接上面的方法


1. 取1±0.05 g的均質樣本(肉樣/魚蝦)、牛奶的離心上清液1.1 mL(相當1 mL奶樣),分別加入4 mL的去離子水,0.5 mL 1 M HCl和100 µL衍生化試劑,充分振盪。


2. 置於56 ℃環境中孵育(2 h)。


3. 分別加入5 mL 0.1 M K2HPO4, 0.4 mL1 M NaOH和5 mL的乙酸乙酯,充分振盪30 s。


4. 在室溫下(20-25 ℃)4000 r/min以上離心10 min。


5. 取出2.5 mL的乙酸乙酯到另一潔淨容器中于50 ℃氮氣/空氣吹干。


    6. 用1 mL正己烷溶解乾燥物,用1mL已稀釋好的復溶液充分混合;在室溫下(20-25 ℃)4000 r/min以上離心10 min。


7. 取50µl下層相用於分析。


樣本稀釋倍數:2


 


六、操作步驟


1. 將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從試劑盒取出,置室溫(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。


2. 按需要取出微孔條及板架,將不用的微孔板重新密封,保存於2-8 ℃,不要冷凍。


3. 加標準品/樣本50 µL /孔,然後加入抗體工作液50 µL/孔,再振盪混勻,用封板膜蓋板,室溫反應30 min。


4. 洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。


5. 加入酶標記物100 µL/孔,用封板膜蓋板,室溫反應20 min。


6. 洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。


   7.顯色:每孔加入底物緩衝液50µl,再加底物液50µl,輕輕振盪混勻,室溫環境下避光顯色10min。


8.測定:每孔加入終止液50µl,輕輕振盪勻,設定酶標儀于450nm處(在20min內讀完數據),測定吸光度值。


 


七、結果判定


以標準品百分吸光率為縱坐標,以AMOZ標準品濃度(ng/ml)的半對數為橫坐標,繪製標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中AMOZ實際濃度。


 


八、注意事項


1.室溫低於20 ℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20-25 ℃)會導致所有標準的OD值偏低。


2.洗板拍干后應立即進行下一步操作。


3.混合要均勻,洗板要徹底,否則會出現重複性不好的現象。


4.反應終止液為2 M硫酸,避免接觸皮膚。


5.將不用的微孔板放進自封袋重新密封; 標準物質和無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。


6.不要使用過了有效日期的試劑盒,不要使用不同批號試劑盒中的試劑。


7.顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之,0標準的吸光度值小於0.6時,表示試劑可能變質。


8.該試劑盒最佳反應溫度為25 ℃,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。


 


九、儲藏條件和保質期


儲藏條件:試劑盒于2-8 ℃保存,不要冷凍。


保質 期:該產品有效期為1年,生產日期見包裝盒

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司
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最後上線︰2019/03/13