1. 測定原理

氯丙嗪檢測試劑盒是利用免疫學直接競爭法的原理，固相載體微孔板上包被有氯丙嗪蛋白偶聯物，加入待測氯丙嗪標準品或樣品溶液及氯丙嗪的抗體，包被在微孔板上的氯丙嗪蛋白偶聯物和標準品或樣品中的氯丙嗪競爭性地與抗體結合，形成抗原抗體復合物；洗滌后再加入二抗，洗滌后加入顯色劑，將無色的顯色劑轉化為藍色的產物；加入反應終止液后使顏色由藍色變為黃色；在450nm波長進行檢測，樣品中的氯丙嗪濃度與吸收光強度成反比。

 

2. 試劑盒組成

（1）96孔酶標板：     1塊 96 T/8孔
（2）標準品：      0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1ppb（1mL/瓶）

（3）抗體工作液：      1瓶（7mL）
（3） 酶標記物：       1瓶（12mL）
（4）底物緩衝液：      1瓶（7mL）
（5）底物液：          1瓶（7mL）
（6）終止液：          1瓶（7mL）
（7）20倍濃縮洗滌液：  1瓶（50mL）， 加蒸餾水稀釋到1000 mL 

（8）復溶液（濃縮）：   1瓶（15ml），加蒸餾水稀釋至300ml

（9）使用說明書        1 份

（10）封板膜：          2張

（11）封口袋：         1 個

 

3. 注意事項 

（1）終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

（2）不要使用過了有效日期的氯丙嗪檢測試劑盒，不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用，以免降低靈敏度。

（3）0標準品的A_450nm<0.6時，表示試劑可能變質，請勿使用。

（4）顯色劑變藍，表明已變質，請勿使用。

 

4. 儲存條件

（1） 2-8℃保存，切勿冷凍。

（2）將不用的酶標板放進帶乾燥劑的封口袋中密封保存。

（3） 酶標記物和顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

 

5. 樣品處理

（1） 尿樣

取新鮮乾淨的尿樣50 μL進行分析。
 （2）組織、肌肉樣品 （稀釋倍數為1）

a．取1g±0.05 g組織，加入6 mL乙腈，振盪10 min,室溫4000 r/min以上離心10 min；

b．取全部上清置於離心管中；在殘渣中再加入4ml乙腈，振盪10 min，室溫4000 r/min以上離心10min。

c．混合兩次上清液，振盪1min，于50 ℃下氮氣或室溫下吹風機吹干；

d．加入1 mL配好的復溶液，取50 μL進行分析。

 

6. 免疫分析時試劑的準備

（1） 注意事項

a) 使用之前將所有試劑回升至室溫。
b) 使用之後立即將所有試劑放回2-8℃。
c) 在使用中不要讓微孔乾燥。
d) 在EIA分析中的重複性，很大程度上取決于洗板的一致性，仔細按照推薦的洗板順序操作是EIA測定程序中的要點。
e) 在所有恆溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

（2） 濃縮洗滌液使用前應根據所需量進行20倍稀釋，即按1 mL濃縮洗滌液加入19 mL蒸餾水的比例進行稀釋。

（3） 復溶液為濃縮溶液，使用前應根據需要量進行20倍稀釋，即按1 mL濃縮洗滌液加入19 mL蒸餾水的比例進行稀釋。

 

7. 測定程序

（1） 將標準品、樣品所需微孔板（均需2個平行試驗）放在反應架上。
（2） 加入50 μL樣品或標準品到微孔板中，再加入50 μL抗體工作液到微孔板中，充分振盪混勻，用蓋板膜蓋板后，37℃下反應30 min 。
（3） 棄去孔中液體，每孔注滿稀釋好的濃縮洗液，輕輕振盪，棄去孔中液體，並在吸水紙上拍干，重複6次。

（4）加入100 μL酶標記物到微孔板中，用蓋板膜蓋板后，37℃下反應20 min 。

（5）棄去孔中液體，每孔注滿稀釋好的濃縮洗液，輕輕振盪，棄去孔中液體，並在吸水紙上拍干，重複6次。
（6）加入50 μL底物液緩衝液，再加入50 μL底物液，輕輕振盪混勻，用蓋板膜蓋板后在37℃下暗處孵育10min。
（7）加入50 μL終止液到微孔板中，混合好在450 nm處測量吸光度值，必須在加入終止液后15分鐘內讀取光度值。

 

8. 測定技術指標

靈敏度：0.1ppb

半抑制濃度（IC₅₀）：≤0.7 ppb

標準曲線範圍：0.1-8.1ppb  

精確度：板內變異誤差小於5%，板間變異誤差小於10%

準確性（回收率）：尿液、組織、肌肉：100±20%

保質期：12個月